间接ELISA实验的缺点是存在交叉反应的可能性（酶标二抗直接与抗原结合），可能会增加背景，同时与直接ELISA相比，间接ELISA实验多了二抗孵育的步骤，实验周期延长。 先将捕获抗体固定于ELISA板孔中，然后加入样品，接着加入检测抗体。
间接ELISA实验的缺点是存在交叉反应的可能性（酶标二抗直接与抗原结合），可能会增加背景，同时与直接ELISA相比，间接ELISA实验多了二抗孵育的步骤，实验周期延长。 先将捕获抗体固定于ELISA板孔中，然后加入样品，接着加入检测抗体。